气相色谱柱维护和保养色谱柱 色谱柱使用方法

　　气相色谱柱在石油、化工、生物化学、医药卫生、食品工业、环保等方面应用很广。它除用于定量和定性分析外，还能测定样品在固定相上的分配系数、活度系数、分子量和比表面积等物理化学常数。一种对混合气体中各组成分进行分析检测的仪器。　　　　一、在实验过程中经常遇到的问题：　　　　新的色谱柱，直接上分析条件来分析样品，发现分离情况不稳定。　　　　新的色谱柱，使用中发现压力突然升高。　　　　新的色谱柱，发现分离度、保留时间发生了变化。　　　　色谱柱使用不频繁，一开始分析样品效果比较好，但是，在使用过程中发现柱效下降快、峰形异常的情况。　　　　色谱峰形异常，基线不稳。　　　　二、发生问题的解决方法：　　　　1、测试柱性能　　　　通常情况下，我们建议用户在拿到色谱柱后，*件事情就是在一台性能完好的仪器系统上，按照厂家说明书对色谱柱进行柱效测试。其实，对于一个合格的色谱分析工作者来说，拿到一根新色谱柱，要开始一个课题之前，都会这样做，目的有二：一、了解色谱柱之前的情况并判断色谱柱是否正常。二、将检测结果小心保存，当实验过程中发现异常时，在检测柱效进行对比，来进一步排查原因。　　　　2、当反相使用高浓度缓冲盐时，注意过渡　　　　在使用高浓度的盐或缓冲液作洗脱剂时，**要注意应先用10％左右的低浓度的有机相洗脱剂过渡一下，否则缓冲液中的盐在高浓度的有机相中很容易析出，造成系统堵塞。另外，在发现系统压力升高异常时，要仔细检查，段段排除包括保护柱、混合器、管路或者流通池等。色谱柱的维护和保养　　　　3、当更换色谱柱时，原来的实验情况发生变化　　　　首先，如果之前开发方法时色谱柱已经做过别的样品，那么之前的样品或使用的流动相对这个样品分析可能有干扰，只能重新找条件。建议：开发方法时使用新的色谱柱。(其次，如果是更换了品牌发生这样的情况，可能是由于不同品牌的键合技术不同，造成了选择性的细微差异，需要调整条件，并再次确定出峰顺序(有些样品的洗脱顺序会改变)。　　　　再次，如果是更换了同品牌型号的新的色谱柱发生这种情况，请检查之前分离时目标与杂质的分离度是否符合要求(Rs大于1.5)，如果一开始只是勉强分开(Rs小于1.5)，那只能说明方法没有优化好，需要再次进行优化。色谱柱的维护和保养　　　　4、样品及前处理　　　　样品要尽可能清洁，可选用样品过滤器或样品预处理柱(SPE)对样品进行预处理；若样品不便处理，要使用保护柱。流动相中所使用的各种有机溶剂要使用色谱纯，配流动相的水是超纯水或双蒸水。如果将所配得流动相再经过0.45μm的滤膜过滤一次则更好，尤其是含盐的流动相。另外，装流动相的容器和色谱系统中的在线过滤器等装置应该定期清洗或更换。　　　　5、色谱柱基线问题　　　　通常情况，基线问题是由于系统或者流动相引起的，和色谱柱关系不大。　　　　三、可能导致的原因：　　　　1、泵头进气泡　　　　2、系统污染　　　　3、流通池漏液　　　　4、流动相使用的某成分易挥发不稳定(检测波长不合适)　　　　5、检测波长低，水的质量不好等等。　　　　6、色谱柱冲洗保养　　　　当使用了缓冲液或含盐的流动相，实验完成后应用10%的甲醇水溶液冲洗30分钟，洗掉色谱柱中的盐，再用甲醇冲洗30分钟。注意：不能用纯水冲洗柱子，应该在水中加入至少10%的甲醇，防止将填料冲塌陷。还有就是不能在这个工作上面打折扣，否则，一些保留强的杂质没有洗脱下来，只能是给后面的工作带来更大的麻烦。如色谱柱要长时间保存，可以储存于纯甲醇或乙腈中，并将购买新色谱柱时附送的堵头堵上。储存的温度是室温。 毛细管色谱柱的选择是怎样的？

毛细管色谱柱的选择该如何呢？

1、膜厚

薄膜比厚膜洗脱组分快、峰分离好、温度低。

一般而言，色谱柱的膜厚为0.25到0.5um。对于流出达300℃的大多数样品(包括蜡、甘油三酯、甾族化合物等)能够很好的分析。

对于更高的洗脱温度，可以用0.1um的液膜。而厚液膜对于低沸点化合物有利，对于流出温度在100℃～200℃之间的物质，用1～1.5um的液膜效果较好。

超厚膜(3～5um)用于分析气体、溶剂和可吹扫出来的物质，以增加样品组分与固定相的相互作用。

另一个选择厚膜的原因是当用大口径柱时保持分离度和保留时间。由于这个原因，大口径柱都是有厚膜。厚膜的流失较大，温度极限必须随膜厚度增加而下降。

2、长度

一般情况，15m柱用于快速筛选简单混合物或分子量**的化合物。30m柱是*普遍地柱长。超长柱(50、60或100、150m)用于非常复杂的样品。

柱长度在柱性能上不是一个重要参数，例如：加倍柱长，恒温分析时间则加倍但峰分辨率仅增大40%。

如果分析只是比较好但不是特别好的，有比增加柱长度更好的办法来分析结果，如考虑更薄的膜，优化载气流量或用程序升温等。

分析活性极强的组分是一种特殊情况。如果样品与柱材质接触，那么峰会严重拖尾。

较厚的膜、相对短的柱可以由于较少的柱材和较厚的固定液体掩盖其表面以屏蔽活性表面从而减少相互作用的机会。

3、内径

增加直径意味着需要更多的固定相，及时厚度不增加，也有较大的样品容量。同时也意味着降低了分离能力且流失较大。

小口径柱为复杂样品提供了所需的分离，但通常因为柱容量低需要分流进样。如果分离度的降低能够接受的话，大口径柱可以避免这一点。

当样品容量是主要的考虑因素时，如：气体、强挥发性样品、吹扫和捕集或顶空进样，大内径甚至PLOT柱可能比较合适。

同时色谱柱内径的选择中要考虑仪器的限制和要求。填充柱的进样口可以使用大口径毛细管柱(0.53mm内径)，而小口径柱就不**能够被连接在仪器上使用。

毛细管柱的进样口一般可以用于所有内径范围的毛细管。(0.1mm、0.25mm、0.32mm、0.53mm)直接联用的GC/MSD和MSD需要小口径柱，因为真空泵不能处理大口径的大流量。查明你的整个系统看看那些是适合那些柱内径的色谱柱。