色谱柱清洗方法及技术交流

　　吸附的主要原因　　反相硅胶柱填充介质(固定相)与样品间常常会发生下列吸附现象：　　(1) 残存硅醇基与碱性物质间的离子吸附；(2) 硅胶表面的金属杂质与金属配位物质间的吸附；　　(3) 疏水性极强的物质在柱中的蓄积。以上现象，会引起反相色谱柱柱效下降、拖尾、重复性不良等状况的发生　　清洗方法　　1、疏水性物质的去除:使用有机溶剂(乙腈、甲醇、乙腈与THF的混合溶剂)进行清洗。 考虑样品成分对于有机溶剂的溶解性，选用比淋洗液浓度高的有机溶剂、或选用极性较低的有机溶剂进行过柱清洗。这种情况下，有必要注意淋洗液中盐的析出现象。　　2、碱性物质(金属配位物质)的去除:使用酸性水溶液与有机溶剂的混合液(0.1%磷酸、0.1%TFA/乙腈、甲醇的混合液)进行过柱清洗。　　*一般来说，清洗时间可选择为过柱5-10个柱体积便可。　　在附吸成分其吸附力极强时，即使进行过清洗，柱性能也有可能得　　不到恢复。另外，请充分考虑淋洗液的pH值，以避免损坏色谱柱。 液相色谱柱的结构说明

　　液相色谱柱的结构：

　　1、空柱由柱接头、柱管及滤片组装而成。

　　柱接头采用低死体积结构，柱接头是两端螺纹组件，一端是为7/16英寸外螺纹，另一端是3/16英寸的内螺纹(**外已规范化)。7/16英寸外螺纹与1/4英寸柱管(Φ6.35mm)连接，中间放置压坏用于密封。3/16英寸的内螺纹与1/16英寸(Φ1.57mm)的连接管连接，中间也放置压环用于柱接头的密封。为了尽量减少柱外死体积，在安装色谱柱时，用Φ1.57mm连接管通过空心螺钉压环后要尽量插到底，然后再拧紧空心螺钉。压环被空心螺钉挤压变形后紧箍在连接管上(连接管通过压环后露出的管长度应严格控制在2．5mm长或其他固定尺寸)。

　　在两端柱接头内，柱管两端各放置一片不锈钢滤片(或滤网)，用于封堵柱填料不被流动相冲出柱外而流失。空柱各组件均为316#不锈钢材质，能耐受一般的溶剂作用。但由于含氯化物的溶剂对其有**的腐蚀性，故使用时要注意，柱及连接管内不能长时间存留此类溶剂，以避免腐蚀。

　　2、柱填料：

　　液相色谱柱的分离作用是在填料与流动相之间进行的，柱子的分类是依据填料类型而定。

　　正相柱：多以硅胶为柱填料。根据外型可分为无定型和球型两种，其颗粒直径在3—10?m的范围内。另一类正相填料是硅胶表面键合—CN，-NH2等官能团即所谓的键合相硅胶。

　　反相柱：主要是以硅胶为基质，在其表面键合十八烷基官能团(ODS)的非极性填料。也有无定型和球型之分。

　　常用的其他的反相填料还有键合C8、C4、C2、苯基等，其颗粒粒径在3—10?m之间。