液相色谱仪的这些使用要点你做到了吗 液相色谱使用方法

　　【***** 使用手册】色谱法，又称“色层法”、“层析法”，早诞生于俄国植物学家——茨维特之手，后在此基础上又相继发展出薄层色谱法、气相色谱法、液相色谱法以及纸色谱法。目前，常见的液相色谱仪生产厂家有沃特世、安捷伦、岛津、依利特、上海分析仪器厂、北京分析仪器厂等。　　在液相色谱仪开机前，我们首先应当做好准备工作，主要有配置试验要求的流动相、安装试验用的色谱、将流动相过滤脱气三点。流动相的过滤，主要是为了除去流动相中的微粒物质，所应用到的滤膜可分脂溶性滤膜(有机滤膜)、水溶性滤膜与通用型滤膜。　　而流动相的脱气，则是为了流动相防止在泵、流路、检测器等仪器组成部分中产生气泡，从而造成泵的不稳定，并增加检测器的噪音。据了解，氦气脱气、真空脱气、超声脱气、加热脱气均可运用于液相色谱仪的流动相脱气。脱气的操作，需要以流动相中的混合物浓度不发生变化为主要原则。　　另外，色谱柱的安装调试，还涉及反相色谱柱与正相色谱柱两种。反向色谱柱多以硅胶为基质，常以硅胶健合C18、C8为填料。值得一提的是，液相色谱仪还应当采用稳定性较高的反相色谱柱。因为，这种色谱柱还能够承受酸与碱的作用。同时，因存在着色谱仪遭受腐蚀的可能性，操作人员还应当勤劳更换每次试验用水，不使用卤化物。后，为控制样品在分析过程中的解离，操作人员还需注意反向色谱柱使用时的pH值，过高的pH值会溶解硅胶，过低的pH则会造成烷基的脱落。　　除上述几个检测的开机准备工作以外，仪器设备本身的质量、色谱条件、操作人员技术熟练程度、仪器安装环境，都是影响着液相色谱仪发挥作用的关键因素。不仅如此，仪器使用者还应当每三个月，就对液相色谱仪的清洗溶剂过滤器及溶剂瓶进行清洗，以此来保证仪器长时间、率的使用。 如何排除液相色谱仪高压泵中的气泡

　　在进行液相色谱仪分析实验时，流动相再进入仪器之前，必须使用超声波清洗机进行简单的除气泡处理，以防对泵造成损害，对检测结果造成干扰。若在检测过程中发现液相色谱仪恒流泵里有气泡，须及时进行排除，排除高压液相色谱仪泵中气泡的方法如下。

　　1、首先，检查流动相储液瓶中的溶剂过滤头是否阻塞。具体做法：将输入三通器上的溶剂塑料连接管的卸下，将流动相储液瓶置于高位，利用压差使溶液流出。如果溶剂流的很顺畅，说明溶剂过滤头是好的。如果是一滴一滴的流出，则说明过滤头阻塞，需要超声清洗，复原。

　　2、用堵头将仪器的高压液流输出口封住将色谱柱连在管路上、，可避免在抽液时将空气抽入管路内。将仪器所配的注射器及塑料连接管插到放空阀的导管上，逆时针旋开放空阀旋钮，抽液5-10mL，将泵的流速设定在每分钟一毫升的流速。启动泵，观察塑料连接管的流动溶液是否还有气泡。如没有气泡说明从过滤头到放空阀这一段已将气泡排除。

　　3、将泵关闭，将堵头从仪器的高压液流输出口去掉将色谱柱从管路上卸掉、使输出口放空。顺时针关闭放空阀旋钮，将泵的流速设定在3-5mL的流速，将泵内的阻尼器和压力传感器的气泡赶出，流出溶液10-15mL将泵关闭。连接上色谱柱，将流速设定在每分钟一毫升，启动泵，观察压力及压力脉动。

　　4、用水和异丙醇甲醇、交替冲洗泵的内腔，使吸附在内墙壁上的气泡赶出。

　　5、应用快速降压法赶出气泡：用小堵头将泵的流动相输出口堵上，将流速设定在1毫升/分，将柱前压力升至20Mpa左右，将排空阀快速打开，重复2~3即可。