液相色谱法在中药材行业的应用 液相色谱使用方法

　　【***** 使用手册】中医药是中华民族的一个伟大瑰宝，在当今科技正在迅速发展的时代，采用高科技手段对中医药进行发掘研究继承创新，是当务之急。液相色谱法自60年代至今，因其具有快速、、灵敏等优点而在中药化学成分分析方面得到了迅速的发展和应用。　　液相色谱法是采用高压输液泵将规定的流动相泵装入有填充剂的色谱柱对样品进行分离测定的色谱方法。近年来对液相色谱监测中药的研究非常多，液相色谱法也是集经典液相色谱和气相色谱的优势于一身。　　在中药材检测方面，液相色谱仪以其对复杂样品成分的高分析能力，能够对人参中皂苷、黄芪中黄芪甲苷、诃黎中鞣花酸、青蒿中青蒿素、田七中田七氨酸等上百种中药材中的多种活性成分进行检测。除了对中药材的活性成分进行检测，液相色谱仪还可以对中药材在种植、运输中产生的有害成分进行检测，对中药种植中的农药残留，运输保存不当而产生的黄曲霉毒素都可以检测。　　实践经验证明，液相色谱的适用范围较广，可用于分析高沸点、热不稳定性、大分子量的样品，是一种非常有效和普遍适用的中药有效成分的分析方法。而随着色谱技术的发展，结合计算机各种软件的开发，液相色谱与各种检测仪器联用，更加拓宽了液相色谱的应用范围。　　液相色谱法应用在中医药质量检测中后，结束了中药材几千年来依靠人工观、摸、闻、尝来鉴定中药材质量的历史，让中药材的检测更具和科学。为不了解中医药的人们揭示了中药材的成分、效力、试验方法，推动了中医药的现代化发展，让中医药的药理有了科学的解释。 液相色谱仪常见六个故障问题 　　液相色谱仪峰分叉怎么回事？

　　造成这种情况的原因一般是色谱柱被污染，或柱头填料塌陷导致的。

　　对于**种情况，先用纯水反向冲洗柱子，然后换成甲醇冲洗，接着用甲醇+异丙醇(4+6)冲洗柱子(冲洗时间的长短由样品污染的情况而定)，再换成甲醇冲洗，然后用纯水冲洗，***后甲醇冲洗正向冲洗柱子30分钟以上。如冲洗后依然出峰不佳，则考虑第二种情况。

　　对于第二种情况，拧开柱头，检查柱填料是否硬结或塌陷。去除硬结部分(污染的填料)，装入新填料，滴一滴甲醇，填料下陷，再填，用与柱内径相同的顶端平滑的不锈钢杆压紧，再填平，滴甲醇，再压紧反复几次，直至装满填平。柱头用甲醇冲洗干净，擦净柱外壁的填料，拧紧柱头，用纯甲醇冲洗30分钟以上。

　　如何排除液相色谱仪气泡溢出故障？

　　流动相内产生都无法**不断产生的气泡，主要是因为过滤器长期沉浸于乙酸铵等缓冲液内，过滤器内部由于霉菌的生长繁殖，形成菌团，阻塞了过滤器，缓冲液难以流畅地通过过滤器，空气在泵的压力作用下经过滤器进入流动相。

　　过滤器浸泡于5%硝酸溶液中，超声清洗几分钟即可；亦可将过滤器浸泡于5%硝酸溶液中12～36小时，轻轻震荡几次，再将过滤器用纯水清洗几次，打开泄压阀，打开purge键清洗脱气，如仍有气泡不断从过滤器冒出，继续将过滤器浸泡于5%硝酸溶液中，如没有气泡不断从过滤器中冒出，说明过滤器内部的霉菌菌团已被硝酸破坏，流动相可以流畅地通过过滤器。打开泄压阀，打开泵，流速调至1.0～3.0ml/min，纯水冲洗过滤器1小时左右。即可将过滤器清洗干净。关闭泄压阀，纯甲醇冲洗半小时即可。

　　自检时有时会出现“钨灯能量低”的错误？

　　一般来说，原因是系统中有挡光物，光路偏离，钨灯电源系统或钨灯灯泡已坏。这时首先要检查光度室是否有挡光物；打开检测器光源室盖，检查氘灯是否点亮；如果氘灯不亮，则关机，更换新氘灯，换时，需注意型号；检查氘灯保险丝，看是否松动、氧化、烧断；如果故障，应立即更换；再开机重新自检；若仍出现上述故障，则重新安装软件后再进行自检。

　　出现压力波动大，流量不稳定？

　　造成这种情况的原因是系统中有空气或者单向阀的宝石球和阀座之间夹有异物，使得两者不能密封。处理工作中注意观察流动相的量，保证不锈钢滤器沉入储液器瓶底，避免吸入空气，流动相要充分脱气。如为单向阀和阀座之间夹有异物，拆下单向阀，放入盛有丙酮的烧杯用超声波清洗。

　　液相色谱仪峰面积重复性不好？

　　主要原因可能有进样阀漏液、加样针不到位或液量不足。针对**种情况，处理时应对更换进样阀垫圈；对于第二种情况保证加样针插到底，注射样品溶液后须快速、平稳地从LOAD状态转换到INJECT状态，以保证进样量的准确。日常工作中，液相色谱仪的保养非常重要，如要注意不要让空气进入输液系统和高压泵中，储液器内的溶液如长时间未用应清洗储液器并更换溶液，每次用完色谱仪后缓冲液要用纯水冲洗干净，防止无机盐析出或沉积；样品的前处理也很重要，**样品都要尽可能地去除杂质，**溶解，尽量减少对色谱柱的污染，以延长色谱柱的使用寿命，同时避免注射过浓的样品溶液，以免残留液在进样阀内析出固体引起堵塞；色谱柱作好标记，用于不同分析目的的色谱柱不要混用等。

　　液相色谱柱压升高？

　　造成柱压升高的原因很多。一般是由于柱床内产生了异常的占位性物体，造成流体阻力加大所引起的。例如，缓冲液盐分如(乙酸铵等)沉积于柱内，或样品污染沉积。针对**种情况，处理时应先用40～50℃的纯水，低速正向冲洗柱子，待柱压逐渐下降后，相应提高流速冲洗，柱压大幅度下降后，用常温纯水冲洗，之后用纯甲醇冲洗柱子30分钟；对于第二种情况，由样品的沉积引起污染的C18柱，和纯水反向冲洗柱子，然后换成甲醇冲洗，接着用甲醇+异丙醇(4+6)冲洗柱子(冲洗时间的长短由样品污染的情况而定)，再用换成甲醇冲洗，然后用纯水冲洗，***后甲醇冲洗正向冲洗柱子30分钟以上。