薄层色谱的使用方法 薄层色谱使用方法

　　【*** 使用手册】薄层色谱是一种较新的色谱法，兼具柱色谱和纸色谱的优点，能快速分离和定性分析少量物质。薄层色谱性能优异，操作也较简单。　　1.选择吸附剂　　吸附剂一般要求直径为10～40μm，需要根据被分离物质的性质选择，常用的吸附剂有以下几种。　　硅胶：微酸性极性固定相，适用于酸性、中性物质分离　　氧化铝：碱性极性固定相，适用于碱性、中性物质分离　　纤维素：含有羟基的极性固定相，适用于分类亲水性物质。　　聚酰胺：含有酰胺基极性固定相，适用于酚类、醇类化合物的分离。　　2.制备薄层板　　薄层板的质量将决定分离的效果，应该尽量均匀且厚薄一致。薄层板的制备主要有两种方法：　　①将洁净干燥的玻璃板置于铺板器中间，在铺板槽中倒入糊状物，自左向右推，将糊状物均匀地涂在玻璃板上。　　②将调成糊状物倒在玻璃板上，或用角匙舀到玻璃板上，再用玻璃棒或角匙铺平并用手捏住玻璃板一角，轻轻碰敲桌面，使薄层表面均匀并除去 糊状物中的气泡。　　制备完成后还需要将涂好的薄层板水平放置于室温下晾干，然后放在烘箱内加热活化。(硅胶板需在烘箱内慢慢升温至105-110度后保温30分钟；氧化铝板需在200-220度烘4小时)　　3.点样　　将待测样品溶在极性尽可能低的溶剂中配成1%的溶液。用一支平口的细毛细管蘸取少量样品溶液点在薄板上。　　4.展开　　薄层层析有多种展开方式，可分为上行、下行、双向展开等，这里介绍一下上行法和下行法。　　上行法：在缸中加入足够量的展开剂，将点好样品的薄层板放入展开缸的展开剂中，密封缸盖，待展 开前沿离薄板上端1cm时，取出薄层板，并用铅笔轻轻画下溶剂前沿，晾干。　　下行法：在展开缸的盖子上装一个小 钩，将展开的纸片钩住，并通过一滤纸条将展 开剂和纸片连起来。待展开剂前沿离纸片下端 1cm时，取出纸片，并用铅笔轻轻画下溶剂前 沿，晾干。　　5.显色　　晾干薄板溶剂后对板上的组分进行定位。将显色剂以喷雾方式直接喷到薄层板上可显示不同颜色的斑点。此外对于无色样品，可采用带荧光剂的吸附剂做薄板，展开后在紫外光下显暗色斑点；对于在光学条件下不显色的物质，可将薄板置于含有少量碘晶体的密闭容器中，与碘作用呈棕色斑点。　　6.Rf值计算　　用尺测量原点到色斑**的距离除以原点到溶剂前沿的距离。不同的物质往往有着不同的Rf值，根据这个就可以简单判断它们是否是同一物质，但Rf值相同之后，还要进行进一步判断才能确定他们是否为同一个物质。 薄层色谱仪的应用如何？

薄层色谱法，是将适宜的固定相涂布于玻璃板、塑料或铝基片上，成一均匀薄层。

待点样、展开后，与适宜的对照物按同法所得的色谱图作对比，用以进行药品的鉴别、杂质检查或含量测定的方法。

薄层扫描仪是可以对斑点进行扫描的专用分光光度计，用可见光或紫外光作光源，线性扫描或锯齿扫描薄层板展开后的斑点；

该斑点就吸收该组分特征波长的单色光，剩余的单色光经透射或反射或发射荧光，由检测器积分起来，获得这块斑点面积的待测物质含量。

薄层色谱(Thin Layer Chromatography)常用TLC表示，又称薄层层析，属于固－液吸附色谱。是近年来发展起来的一种微量、快速而简单的色谱法，它兼备了柱色谱和纸色谱的优点。

一方面适用于小量样品（几到几十微克，甚至0.01μg）的分离；另一方面若在制作薄层板时，把吸附层加厚，将样品点成一条线，则可分离多达500mg的样品。

因此又可用来精制样品。故此法特别适用于挥发性较小或在较高温度易发生变化而不能用气相色谱分析的物资。

此外，在进行化学反应时，常利用薄层色谱观察原料斑点的逐步消失来判断反应是否完成。

薄层色谱是在被洗涤干净的玻板（10×3cm左右）上均匀的涂一层吸附剂或支持剂；

带干燥、活化后将样品溶液用管口平整的毛细管滴加于离薄层板一端约1cm处的起点线上；

凉干或吹干后置薄层板于盛有展开剂的展开槽内，浸入深度为0.5cm。

待展开剂前沿离顶端约1cm附近时，将色谱板取出，干燥后喷以显色剂，或在紫外灯下显色。