柱温箱在液相色谱中的作用 液相色谱使用方法

　　【*** 使用手册】色谱法的分离试验方法是溶于流动相(mobile phase)中的各组分经过固定相时，由于与固定相(stationary phase)发生作用(吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和)的大小、强弱不同，在固定相中滞留时间不同，从而先后从固定相中流出的分离过程，其实质是一个吸附与解吸附的平衡过程。　　色谱柱与流动相的温度，影响着组分的分离平衡，对于使用柱温箱的有益之处我们认为有以下几点：　　1. 可以使保留时间相对恒定，对需要进行的定性鉴别可提高其可信度；　　2. 保留时间相对恒定是进行定量的基础，不同的保留时间不仅不能判断其成份的一致性，同时，由于保留时间不同峰面积也必将发生变化，其检测结果的可信度将受质疑。　　3. 温差较大时，因保留时间不稳将增加检测工作的麻烦。　　4. 温度低的时候，因流动相黏度增加而使检测时间延长，同时增加泵的磨损，影响设备的使用寿命。　　5. 温度低的时候还因溶解度相对下降而出现缓冲盐结晶而堵塞泵、进样阀、管道、色谱柱的现象。　　6. 温度低时还因溶解度下降使杂质吸附在填料上而难于洗脱，从而 影响色谱柱的使用寿命。　　☆对于流动相温度的控制目前没有很好的方法，即使是整个室内使用空调也难于使流动相的温度保持一致，因此，目前大多采用控制柱温的方法，使用柱温箱能耗低，控温精度高，是液相色谱仪**的辅助设备，药品标准中，有不少品种对柱温也有明确要求。 有关液相色谱仪的系统组成介绍

液相色谱仪系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。

储液器中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相；

被流动相载入色谱柱（固定相）内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数；

在两相中作相对运动时，经过反复多次的吸附-解吸的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别；

被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪；

数据以图谱形式打印出来**液相色谱仪主要有进样系统、输液系统、分离系统、检测系统和数据处理系统；

下面将分别叙述其各自的组成与特点。

进样系统

一般采用隔膜注射进样器或高压进样间完成进样操作，进样量是恒定的。

这对提高分析样品的重复性是有益的。

输液系统

该系统包括高压泵、流动相贮存器和梯度仪三部分。

高压泵的一般压强为47～44X10Pa，流速可调且稳定，当高压流动相通过层析柱时；

可降低样品在柱中的扩散效应，可加快其在柱中的移动速度；

这对提高分辨率、回收样品、保持样品的生物活性等都是有利的。

流动相贮存器和梯度仪，可使流动相随固定相和样品的性质而改变；

包括改变洗脱液的极性、离子强度、PH值，或改用竞争性抑制剂或变性剂等。

这就可使各种物质（即使**一个基团的差别或是同分异构体）都能获得有效分离。

分离系统

该系统包括色谱柱、连接管和恒温器等。

色谱柱一般长度为10～50cm（需要两根连用时，可在二者之间加一连接管）；

内径为2～5mm，由"优质不锈钢或厚壁玻璃管或钛合金等材料制成；

住内装有直径为5～10μm粒度的固定相（由基质和固定液构成）。

固定相中的基质是由机械强度高的树脂或硅胶构成；

它们都有惰性（如硅胶表面的硅酸基因基本已除去）、多孔性（孔径可达1000?）和比表面积大的特点；

加之其表面经过机械涂渍（与气相色谱中固定相的制备一样）；

或者用化学法偶联各种基因（如磷酸基、季胺基、羟甲基、苯基、氨基或各种长度碳链的烷基等）或配体的有机化合物。

因此，这类固定相对结构不同的物质有良好的选择性。

例如，在多孔性硅胶表面偶联豌豆凝集素（PSA）后，就可以把成纤维细胞中的一种糖蛋白分离出来。

另外，固定相基质粒小，柱床极易达到均匀、致密状态，极易降低涡流扩散效应。

基质粒度小，微孔浅，样品在微孔区内传质短。这些对缩小谱带宽度、提高分辨率是有益的。

根据柱效理论分析，基质粒度小，塔板理论数N就越大。

这也进一步证明基质粒度小，会提高分辨率的道理。

再者，**液相色谱的恒温器可使温度从室温调到60C；

通过改善传质速度，缩短分析时间，就可增加层析柱的效率。