流式细胞仪的流动室维护和保养 流式细胞仪使用方法

　　流式细胞仪（Flow cytometer）是对细胞进行自动分析和分选的装置。它可以快速测量、存贮、显示悬浮在液体中的分散细胞的一系列重要的生物物理、生物化学方面的特征参量，并可以根据预选的参量范围把指定的细胞亚群从中分选出来。多数流式细胞计是一种零分辨率的仪器，它只能测量一个细胞的诸如总核酸量，总蛋白量等指标，而不能鉴别和测出某一特定部位的核酸或蛋白的多少。也就是说，它的细节分辨率为零。　　　　了解如何正确地维护和保养流动室，可zui大化延长流动室的性能和使用期限。而不正确的使用和维护，则可能产生不正确的读数和数据，而且会使得你不停呼叫工程师甚至更换流动室或光路。　　　　一、需避免的化学物质　　　　目前大部分流动室都是由石英或熔融石英制作而成，故需避免pH值大于9.5的碱性溶液非常重要。这些溶液可能腐蚀石英，使其变毛糙，影响光学性能。一旦使用过碱性溶液，在流动室的通路上可能会看到一些被腐蚀的条纹，如果这些条纹刚好位于激光器检测点，那么就可能影响检测准确性。　　　　二、如何避免结晶　　　　避免结晶很重要。为了避免流动室内液体结晶，需经常用水冲洗。在跑完缓冲液或生理盐水之后，尤其是高pH值的溶液后，**冲洗**必要。有些流动室内部会包被一些特殊材料，以防止**或结晶生长。　　　　三、清洗　　　　清洗流动室和光路连接器对于**流式细胞仪的正确运行都**重要。其中zui重要的一点就是别让流动室的液体干掉，而含有盐分、蛋白或其它固态溶解物的液体，均可能损伤液路。　　　　的清洁方式就是用充满10％表面活性剂的针头连接流动室，将活性剂注入流动室，多次注射后，将液体留在流动室内至少2小时。zui后关机前，流动室必须**用蒸馏水充满。　　　　如果流动室只是过夜，第二天马上就用，那么可以用buffer充。　　　　如果要过一个周末或长时间不用，那么建议使用蒸馏水或20％乙醇充。　　　　四、操作和使用中的注意事项　　　　1.光电倍增管要求稳定的工作条件，暴露的较强的光线下以后，需要较长时间的“暗适应”以**或降低部分暗电流本底才能工作；另外还要注意磁屏蔽；　　　　2.光源不得在短时间内（一般要1h左右）关上又打开；使用光源必须预热并注意冷却系统工作是否正常；　　　　3.液流系统必需随时保持液流畅通，避免气泡栓塞，所使用的鞘流液使用前要经过过滤、**；　　　　4.注意根据测量对象的变换选用合适的滤片系统、放大器的类型等；　　　　5.特别强度每次测量都需要对照组。 流式细胞仪的发展历史

　　1、1934年，Moldavan使悬浮的红细胞从一个毛细玻璃管中流过，每个通过的细胞可被一个光电装置记录下来。这就是流式细胞仪的雏形。　　2、1965年，Kamentsky用紫外吸收和可见光散射两个参数同时测量未染色细胞，给出细胞中核酸的含量和细胞大小。奠定了多参数流式细胞测量的基础。　　3、1967年，Van Dilla和Los Alamos采用了层流流动室和氩激光器，开发出了液流束、照明光轴、检测系统三者相互垂直的流式细胞仪。这成为目前各种流式细胞仪的基础。　　4、1969年，Fulwyler利用静电墨水喷射液滴偏转技术，建立了流式细胞分选术。Ehrlich和Wheeless利用飞点扫描技术和缝扫描技术使零分辨率的流式细胞仪变成了低分辨率的流式细胞仪。　　5、20世纪70年代，随着Kohler和Milstein成功提出了单克隆抗体技术和荧光标记技术，为特异研究和分析细胞奠定了良好的基础。　　6、1973年，美国BD公司和美国斯坦福大学合作，研制开发并生产了世界上**台商用流式细胞仪FACS I。　　7、20世纪80年代，流式细胞仪的数据采集、存储、显示、分析日趋完善，随着样品制备方法的增加，新的荧光染料和细胞标记物的出现，使流式细胞仪的应用范围逐渐扩大。　　8、20世纪90年代，与之配套的标本制备仪和自动进样器的问世，以及适合临床应用的单克隆抗体的增加，使流式细胞仪逐渐从科研单位进入医院的**实验室和检验科，成为现代化的临床检验仪器的一部分。