如何选择一款的液相色谱仪 液相色谱使用方法

　　【***** 使用手册】选择一台好的液相色谱仪对企业、实验室的生产工作有很大的帮助，那么选择一台好的液相色谱仪该注意哪些因素呢？首先是看指标，而液相色谱仪的指标很多，有泵的、检测器的、色谱柱等等；然后就是国家标准，仪器的主要指标有噪音，漂移，zui小检测浓度，定性定量重复性等，笔者将从这两个方面一一为读者朋友们分析。　　1、噪音　　噪音的大小直接关系到仪器的检测灵敏度，噪音越大，检测的灵敏度就越低。对于检测低含量的样品就要求仪器的噪音越小越好，否则噪音过大将会导致基线不稳，甚至影响分析结果。　　2、漂移　　漂移是指仪器稳定后一段时间内基线漂离原点的距离，通常用来衡量仪器稳定快慢。高品质的仪器能在较短的时间内达到稳定，从而在**程度上提高了分析效率。　　3、色谱柱　　色谱柱是液相色谱仪的心脏，通常要求柱效高、选择性好，分析速度快等。目前市场上销售的用于HPLC的各种微粒填料如多孔硅胶以及以硅胶为基质的键合相、有机聚合物微球(包括离子交换树脂)、氧化铝、多孔碳等，其粒度一般为3,5,7,10μm等，柱效理论值可达5~16万/米。　　4、进样器　　进样装置要求：密封性好，重复性好，死体积小，保证**进样，进样时对色谱系统的压力、流量影响小。而且进样方式多种多样，可分为隔膜进样、停流进样、阀进样、自动进样。自动进样器则是市场发展的趋势。　　5、数据处理系统　　一般专业的液相色谱仪生产厂家都有自己配套的液相色谱仪控制软件，但有不少液相色谱仪可以使用通用型的色谱数据工作站进行数据计算处理，在数据处理系统方面需根据自身资金来调整。　　6、操作简便　　操作方便性无论是对新手还是成熟的用户都是很重要的，操作越简单不仅用户上手更快，也有利于提高分析效率，也为以后分析方法的拓展提供有力的帮助。　　目前**外都有着比较知名的液相色谱仪生产销售企业，只要把握了以上几点，并选择较为知名的液相色谱仪生产销售企业，相信读者朋友们都能够选购到心仪的液相色谱仪器。 反相**液相色谱柱的维护如何？

反相**液相色谱柱是基于溶质、极性流动相和非极性固定相表面间的疏水效应建立的一种色谱模式，**一种有机分子的结构中都有非极性的疏水部分，这部分越大，一般保留值越高。

在**液相色谱中这是应用面较广的一种分离模式，在生物大分子的反相液相色谱条件下，流动相多采用酸性的、低离子强度的水溶液，并加**比例的能与水互溶的异丙醇、乙腈或甲醇等有机改性剂，大量使用的填料为孔径在30纳米以上的硅胶烷基键合相，除此之外，也有少量高聚物微球。

反相**液相色谱柱的使用和维护

在色谱操作过程中，需要注意下列问题，以维护色谱柱。

(1)柱子在装卸、更换时，动作要轻，接头拧紧要适度。必须防止较强的机械振动，以免柱床产生空隙。

(2)如果仪器用来做常规分析，样品种类有限，但分析次数多，则不妨为每一类常规分析配置一根专用柱，这样有助于延长柱子的寿命。

(3)避免压力和温度的急剧变化及**机械震动。

温度的突然变化或者使色谱柱从高处掉下都会影响柱内的填充状况；柱压的突然升高或降低也会冲动柱内填料，因此在调节流速时应该缓慢进行，在阀进样时阀的转动不能过缓。

(4)应逐

渐改变溶剂的组成，特别是反相色谱中，不应直接从有机溶剂改变为**是水，反之亦然。

(5)如使用柱温控制装置时，应注意在通人流动相后才能升温。

(6)一般说来反相**液相色谱柱不能反冲，只有生产者指明该柱可以反冲时，才可以反冲除去留在柱头的杂质。否则反冲会迅速降低柱效。

(7)选择使用适宜的流动相，以避免固定相被破坏。有时可以在进样器前面连接一个预柱，分析柱是键合硅胶时，预柱为硅胶，可使流动相在进入分析柱之前预先被硅胶“饱和”，避免分析柱中的硅胶基质被溶解。

(8)避免将基质复杂的样品尤其是生物样品直接注人柱内，需要对样品进行预处理或者在进样器和色谱柱之间连接一个保护柱。保护柱一般是填有相似固定相的短柱。保护柱可以而且应该经常更换。

(9)经常用强溶剂冲洗色谱柱，**保留在柱内的杂质。在进行清洗时，对流路系统中流动相的置换应以相混溶的溶剂逐渐过渡，每种流动相的体积应是柱体积的20倍左右，即常规分析需要50-75mL。

(10)保存色谱柱时应将柱内充满乙腈或甲醇，柱接头要拧紧，防止溶剂挥发干燥。**禁止将缓冲溶液留在柱内静置过夜或更长时间。

(11)反相**液相色谱柱使用过程中，如果压力升高，一种可能是烧结滤片被堵塞，这时应更换滤片或将其取出进行清洗；另一种可能是大分子进人柱内，使柱头被污染；如果柱效降低或色谱峰变形，则可能柱头出现塌陷，死体积增大。

(12)在完成分离分析工作之后，不应立即停机，需及时对色谱分析系统进行冲洗，一般0.5h以上，以除去色谱柱内的杂质。

在日常分离分析工作中，反相**液相色谱柱的正确使用和维护**重要，色谱柱使用是否得当，直接影响色谱柱的寿命，稍有不慎就会降低柱效、缩短使用寿命甚至损坏。