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高效毛细管电泳色谱仪填充柱制备方法 色谱仪使用方法

时间:2023-01-02 09:30:02 作者:河北航信仪器 点击:

【导读】**毛细管电色谱仪(CEC)填充毛细管柱是将固定相填充到毛细管中,通过两端烧结柱塞将固定相保持在毛细管中而成,其**优点是可利用众多的HPLC固定相,根

**毛细管电色谱仪(CEC)填充毛细管柱是将固定相填充到毛细管中,通过两端烧结柱塞将固定相保持在毛细管中而成,其**优点是可利用众多的HPLC固定相,根据化合物与固定相的作用不同实现**分离,在CEC中应用***广泛。

**毛细管电泳色谱仪填充柱制备方法 色谱仪使用方法(图1)

填充毛细管柱制备方法有高压匀浆填充法、电动填充法和超临界CO2法等。

一、高压匀浆填充法:

高压匀浆填充法是填充毛细管柱***常用的制备方法。

填充过程一般包括烧结进样端柱塞、高压填充、烧结出口端柱塞、除去不需要的固定相和检测窗口制作等步骤。

高压匀浆填充法简单,快速,但操作技术要求较高。由于在分离样品时施加电场,会使表面带电荷的固定相沿某一方向电泳,容易造成柱局部过于紧密产生较大的压力,而局部由于固定相迁移形成较大的空隙。

二、电动填充法:

电动填充是利用电泳试验方法,使固定相在**pH下带电荷,在电场中定向移动而把固定相填充到毛细管中。与高压匀浆填充法相比,电动填充法可有选择地把荷质比相同的固定相填入毛细管中,柱床均匀。

三、超临界CO2法:

超临界CO2法是在毛细管柱一端制作临时柱塞后,另一端与贮液罐相连,将预填充的填料放入贮液罐中,然后利用超临界CO2将填料填入毛细管中,再缓慢释放压力至常压而得到干的色谱柱。柱使用前用流动相润洗,平衡。

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高速逆流色谱法于1982年由美国国立卫生院Ito博士研制开发的一种新型的、连续**的液液分配色谱技术,与其它色谱技术不同的是它不需**固态载体,因此能避免固相载体表面与样品发生反应而导致样品的污染、失活、变性和不可逆吸附等不良影响。

同时它也具有适用范围广、快速、进样量大、费用低、回收率高等优点。因此,己在生物、医药、食品、材料、化妆品和环保等领域获得了广泛的应用,尤其是在天然产物活性成分的分离纯化领域倍受重视。

高速逆流色谱仪试验方法及特点

HSCCC利用了一种特殊的流体动力学(单向流体动力学平衡)现象。具体表现为一根100多米长的螺旋空管,注入互不相溶的两相溶剂中的一相作为固定相,然后作行星运动;同时不断注入另一相(流动相),由于行星运动产生的离心力场使得固定相保留在螺旋管内,流动相则不断穿透固定相;这样两相溶剂在螺旋管中实现**的接触、混合、分配和传递。由于样品中各组分在两相中的分配比不同,因而能使样品中各组分得到分离。

重现性好。如果样品不具有较强的表面活性作用,酸碱性也不强,那么多次进样,其分离过程稳定性都保持很好、峰的保留相对标准偏差也小于2%,重现性相当好。

应用领域:

(1)天然产物已知有效成分的分离纯化

(2)化学合成物质的分离纯化

(3)中药一类、五类新药的开发

(4)中药指纹图谱和质量控制研究

(5)***的分离纯化

(6)天然产物未知有效成分的分离纯化(新化合物开发)

(7)海洋生物活性成分的分离纯化

(8)放射性同位素分离

(9)多肽和蛋白质等生物大分子分离以及手性分离等

应用范围广,适应性好。由于溶剂系统的组成与配比可以是**多的,因而从理论上讲HSCCC适用于**极性范围的样品的分离,所以在分离天然化合物方面具有其独到之处。并因不需固体载体,而**了气液色谱中由于使用载体而带来的吸附现象,特别适用于分离极性物质和其它具有生物活性的物质。

一、根据相对分子质量选择:

1、相对分子质量很低的样品采用气相色谱。

2、液液分配色谱、液固吸附色谱和离子交换色谱***适合分析相对分子质量为 200~2000 的样品。

3、相对分子质量大于 2000 的样品,采用凝胶色谱为优。

二、根据溶解度选择:

1、溶于水并能离解的样品,采用离子交换色谱。

2、溶于烃类(如苯或异辛烷等)的样品,可采用液固吸附色谱。

3、溶于 CCl4 的样品,多采用液液分配色谱和液固吸附色谱。

4、既溶于水又溶于异丙醇的样品,常用水和异丙醇的混合液作液液分配色谱的流动相,以疏水性化合物作固定相。

三、根据分子结构选择:

1、酸、碱化合物采用离子交换色谱。

2、脂肪族和芳香族采用液液分配色谱、液固吸附色谱。

3、异构体采用液固吸附色谱。

4、同系物不同官能团和强氢键化合物采用液液分配色谱。


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