液相色谱仪的检定方法及技术交流

1.适用范围

适用于岛津LC-10AD型液相色谱仪的检定。

2.职责

检验员：严格按照检定规程进行周期检定。

QC主管：监督检查检定规程执行情况。

3.检定项目和技术要求

3.1.输液系统

3.1.1.泵流量设定值误差：Ss＜±2%；流量稳定性误差：＜±2%

3.1.2.定性测量重复性误差（5次定量管进样）：RSD≤1.5%

3.1.3.定量测量重复性误差（5次定量管进样）：RSD≤1.5%

3.2.紫外检测器性能

3.2.1.可调波长紫外—可见光检测器波长示值误差：＜±2nm；重复性误差：＜±1nm

3.2.2.基线漂移：≤5×10^-3（AU/h）；基线噪声：≤5×10^-4(AU)

3.2.3.zui小检定浓度（静态）：4×10^-8g/ml（萘的甲醇溶液）

4.检定条件

4.1.环境温度为10～30℃，8小时内温度波动不超过±3℃，相对湿度低于65%。

4.2.电源电压：220±22V，电源频率：50±0.5Hz。

4.3.检定设备

4.3.1.秒表：分度值小于0.1s。

4.3.2.分析天平：zui大称量200g，zui小分度值0.1mg。

4.3.3.容量瓶

4.3.4.微量注射器

4.3.5.标准物质和试剂

5.检定方法

5.1.泵流量设定值误差Ss、流量稳定性误差S_R的检定。

将仪器的输液系统、进样器、色谱柱和检测器联接好，以甲醇为液动相，按表1设定流量，待流速稳定后，在流动相排出口用事先清洗称重过的容量瓶收集流动相，同时用秒表计时，准确地收集10～25分钟，称重，按下式计算Ss和S_R。

Ss=（Fm—Fs）/Fs×**

S_R=（Fmax—Fmin）/F×**

式中Ss为流量设定值误差（%）；

Fm=（W2—W1）ρt·t为流量实测值；

W2：容量瓶+流动相的重量（g）；

W1：容量瓶的重量（g）；

Fs：流量设定值（ml/min）；

ρt：实验温度下流动相的密度（g/cm³）；

t：收集流动相的时间（min）；

S_R：流量稳定性误差（%）；

Fmax：同一组测量中流量zui大值（ml/min）；

Fmin：同一组测量中流量zui小值（ml/min）；

F：同一组测量中的算术平均值（ml/min）。

5.2.定性、定量测量重复性的检定

将仪器联接好，使之处于正常工作状态，用进样阀的定量管注入适当的标准溶液（萘或联苯）或稳定的待分析样品溶液，记录保留时间和峰面积，连续测量5次，按下式计算相对标准偏差RSD。

5.3.紫外检测器性能5.3.1.可调波长紫外-可见光检测器波长示值误差和重复性误差的检定将检测器与记录仪联好，接通电源稳定后，先将检测波长调至235nm，用甲醇用流动相，流速1.0ml/min，用进样器注入重铬酸钾的硫酸溶液（取120℃干燥至恒重的基准重铬酸钾约60mg，精密称定，用0.005mol/L硫酸溶液溶解并稀释至1000ml，摇匀，即得）20ul，待出峰时立即停泵，改用波长扫描方式，得到重铬酸钾在紫外-可见光区的吸收曲线，记录其在235nm、257nm、313nm、350nm附近波长处的zui大或zui小吸收波长，分别找出各点zui大或zui小波长与标准波长之差即为波长示值误差；重复测定3次，各点zui小与zui大值之差即为波长重复性误差。5.3.2.基线漂移和基线噪声的检定将仪器各部分联接好，紫外检测器波长调到254nm，流动相为**甲醇，流速为1.0ml/min，吸收度范围选择zui灵敏档，开机，待基线稳定后，记录基线30-40分钟，计算基线漂移和噪声。5.3.3.zui小检测浓度在静态条件下，用进样器注入4×10^-8g/ml萘的甲醇溶液，样品峰高应大于或等于两倍基

线噪声峰高，按下式计算zui小检测浓度。

C_l=2×H_N×C /H

式中，C_l：zui小检测浓度（g/ml）；

H_N：噪声峰高（记录仪器数或实测高度cm）；

C：样品浓度（g/ml）；

H：样品峰高（记录仪器数或实测高度cm）。

6.检定结果处理和检定周期

6.1.检定结果**项目均符合技术要求者，判为合格，方可使用。若个别部件、某一指标达不到要求，确难以维修而又不影响定性、定量结果准确性者，可作为准用品。

6.2.液相色谱仪的检定周期为两年，若更换部件或对仪器性能有怀疑时，应随时检定，并记录检定结果。

**液相色谱仪的工作过程：

储液器中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱(固定相) 内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中做相对运动时，经过反复多次的吸附- 解吸的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪，数据以图谱形式打印出来。以下是总结**液相色谱仪的的应用：

1、在食品分析中的应用

食品营养成分分析：蛋白质、氨基酸、糖类、色素、维生素、香料、有机酸（邻苯二甲酸、柠檬酸、苹果酸等）、有机胺、矿物质等；

食品添加剂分析：甜味剂、防腐剂、着色剂（合成色素如柠檬黄、苋菜红、靛蓝、胭脂红、日落黄、亮蓝等）、抗氧化剂等；

食品污染物分析：霉菌毒素（黄曲霉毒素、黄杆菌毒素、大肠杆菌毒素等）、微量元素、多环芳烃等。

2、在环境分析中的应用

多环芳烃（特别是稠环芳烃）、农药（如氨基甲酸脂类，反相色谱）残留等。

3、在生命科学中的应用

HPLC技术目前已成为生物化学家和医学家在分子水平上研究生命科学、遗传工程、临床化学、分子生物学等必不可少的工具。其在生化领域的应用主要集中于两个方面：

低分子量物质，如氨基酸、有机酸、有机胺、类固醇、卟啉、糖类、维生素等的分离和测定。

高分子量物质，如多肽、核糖核酸、蛋白质和酶（各种胰岛素、**、细胞色素、干扰素等）的纯化、分离和测定。

4、在医学检验中的应用

体液中代谢物测定；药代动力学研究；临床**监测：

合成**：***、抗忧郁**（冬眠灵、氯丙咪嗪、安定、利眠宁、苯巴比妥等）、黄胺类药等。

天然**生物碱（吲哚碱、颠茄碱、鸦片碱、**甙）等