液相色谱系统的组成及保养知识及维修保养

　　一套液相色谱系统大致分为以下几个部分：流动相前处理部分、输液部分、进样部分、分离部分、检测部分。　　一、流动相前处理　　流动相前处理主要包括过滤和脱气，使用设备主要为溶剂过滤器、真空泵和超声波。　　1、过滤。HPLC所用流动相必须预先过滤和脱气，过滤的作用是防止颗粒性的杂质堵塞系统，或影响单向阀的正常工作。过滤时需要注意滤膜的选择，油膜和水系膜必须分开使用。水膜易有机溶剂溶解而进入系统导致泵流路和色谱柱头的堵塞。　　2、超声。超声的作用是去除流动相中的气泡。超声时间一般在20min即可。超声后，液体温度会升高，应冷却到室温再使用。超声后的流动相若需隔天使用再次超声。　　二、输液系统　　输液系统即是指高压恒流泵，其作用是能提供稳定准确的流速。　　1、溶剂过滤头。吸液过滤头，或称沉子，主要作用是过滤流动相中可能存在的颗粒性杂质。长时间使用后，杂质有可能阻塞溶剂过滤头上的过滤板孔隙；或长时间使用缓冲液，过滤头表面容易产生一层膜，阻碍流动相正常通过。严重时，即使是已超声过的溶剂，泵吸液时也会有气泡在四氟输液管里产生，因此应经常对过滤头进行清洗。清洗溶剂可以选择乙醇或者30%稀硝酸溶液，正相系统需注意滤头的烘干处理。　　2、单向阀。单向阀的作用是确保液体向一个方向流动，是高压恒流泵稳定输液的保证。日常使用过程中，可以通过观察压力的情况，初步判断流量是否正常。如果系统已经平衡一段时间，压力应该是稳定的。但如果压力存在波动，则表明流量不稳定；如果无压力，则表明无流量。这两种情况大多是因为单向阀里混入了气泡或杂质。混入气泡的情况，应把放空阀打开，按冲洗键将里面的气泡排出。单向阀混入杂质的情况，须对其进行清洗。清洗溶剂可以选择乙醇，安装时注意标记环的方向。 单向阀装配图及剖面图 1 带标记环阀外套；2 陶瓷座；3 宝石球；4 带密封垫限位套；5 密封垫　　3、密封圈。密封圈是固定在柱塞杆上防止泵腔内的液体泄漏，是保证泵头输液正常的关键部件。但柱塞杆和柱塞密封圈长期使用会发生磨损，主要与流量、操作压力和所使用的流动相有关。当使用含盐的流动相时，由于脱水或蒸发，可能形成盐结晶，而泵运动时盐结晶会导致密封圈和柱塞杆的磨损。因此，每天实验前和实验后都需用纯水冲洗一次密封圈(在柱塞密封圈和二级密封圈之间)，保持清洗管内有水以防止形成晶体，延长柱塞杆和密封圈的使用寿命。 等度系统 梯度系统 柱塞杆清洗连接示意图　　4、在线过滤器。为了防止由于流动相杂质微粒进入色谱系统，泵在放空阀内安装了在线过滤器，经泵出口流出的液体通过在线过滤器，经排空管流出的液体不通过在线过滤器。仪器使用**时间后，建议用户清洗在线过滤器的烧结不锈钢过滤片。用扳手卸下压帽，将密封环和烧结不锈钢过滤片一同取出清洗，清洗后按原位装上。清洗溶剂可以选择30%稀硝酸溶液，正相系统需注意滤头的烘干处理。　　三、进样系统　　进样系统分为手动进样阀和自动进样器。　　1、手动进样阀。对于手动进样阀使用过程中需要注意每个样品进样完成后应对进样阀进行清洗，防止残留对下一个样品分析的影响。还需要注意进样方式，以20μL定量环为例，我们可以选择**充满定量管或部分充满定量管。为了保证进样的重复性，选择**充满定量管进样方式时，需要注入定量环体积3倍以上的样品；选择部分充满定量管进样方式时，进样体积应在定量管体积一半以下，即1-10μL。　　2、自动进样器。如果采用自动进样器进样，首先需要保证注射器里面没有气泡存在，否则影响进样量准确性；其次是样品瓶里面有足够的样品，保证进样针能够吸到样品。为了避免交叉污染需要定期对样品瓶、盖和垫进行清洗。若自动进样器长时间不使用，应该注意：腐蚀性的流动相或洗液(例如，碱性或酸性缓冲溶液)必须**从系统中置换出来。同时，为了避免**的生长，应将一个样品瓶中充满甲醇，并重复几次进样操作。　　四、分离系统　　分离系统包括色谱柱、保护柱以及柱温箱。　　1、色谱柱。色谱柱是样品分离的核心。色谱柱在使用前必须仔细阅读说明书，了解色谱柱使用的pH值范围、溶剂耐受范围、压力范围和维护方法等事项。色谱柱使用完后，需及时对色谱柱进行冲洗。冲洗完成后，应该将色谱柱从仪器上拆下来，两端用厂家配的堵头密封后，保存在色谱柱盒里。　　2、保护柱。保护柱的作用主要是防止吸附性强的杂质对色谱柱污染，从而延长色谱柱的寿命。针对不同型号的色谱柱，应选择相对应填料的保护柱。应注意柱芯也是有寿命的，应该定期进行更换。　　3、柱温箱。色谱柱温度变化，可能会导致保留时间的变化。为了避免这个问题，建议使用柱温箱。　　五、检测系统　　HPLC常用的检测器是紫外检测器。在日常使用过程中紫外检测器主要需要注意检测池和氘灯的使用与维护。　　1、检测池。检测池长时间使用可能会造成污染，如果仪器的参比能量(REF ENERGY)正常，测量能量(SMP ENERGY)偏低，可能为检测池污染导致，可以对检测池进行清洗。对检测池零件的进行清洗，一般先采用约1：4的硝酸溶液超声清洗，分别用纯水和甲醇溶液清洗，然后重新组装并将检测池池体推进池腔内，拧紧池板螺丝。注意组装中，池玻璃及垫片**要放正，以免压碎池玻璃，造成检测池泄漏。　　2、氘灯。氘灯正常使用寿命可在1500小时以上。灯的使用寿命与检测器的使用时间和开启频率有关，因此使用过程中应尽量节省不必要的开机时间，减少开关频率，以延长氘灯的使用寿命。如果准确地判断出氘灯已经不能点亮或能量太低，则需要更换新的氘灯。在购买氘灯时，应注意咨询和核对氘灯的型号与仪器型号是否匹配。更换到氘灯时，参照仪器说明书中的相关内容，特别要注意氘灯连接线的位置顺序。 液相色谱仪的日常维护与注意事项

　　液相色谱仪的日常维护与注意事项

　　一、日常维护：

　　1.定期清洗单向阀：将单向阀卸下，一般先用纯净水超声10分钟，然后用异丙醇超声，10分钟；也可直接用异丙醇超声10分钟。

　　2.定期清洗吸滤头：将吸滤头卸下，一般先用纯净水超声10分钟，然后用异丙醇超声10分钟；也可直接用异丙醇超声10分钟。

　　3.定期冲洗检测池：把色谱柱卸下，在流速1.0ml/min的状态下先用纯净水冲洗30分钟，然后再用30%

　　磷酸（色谱级）冲洗30分钟左右，再用超纯水冲洗至流出液为中性，***后用甲醇冲洗，待用。

　　二、注意事项：

　　1.开始进样前30分钟开氘灯即可，节约灯的能量和使用时间。

　　2.流动相的使用和注意事项：

　　①所用流动相必须预先滤过和脱气，流动相一般贮存于玻璃不锈钢容器内。贮存容器**要盖严，防止溶剂挥发引起组成变化。磷酸盐、乙酸盐缓冲液很易长霉，应尽量新鲜配制使用，不要长期贮存。容器应定期清洗，特别是盛水、缓冲液和混合溶液的瓶子，以除去底部的杂质沉淀和可能生长的微生物。

　　②配制流动相用水需为娃哈哈牌纯净水或经超声过滤后的纯化水，流动相配制好后先用直径为5cm，孔径为0.45ｕm的滤膜，通过沙芯过滤器的过滤，然后在超声仪上超声。

　　③不得将装流动相的容器直接放置与超声仪内，需放与筛网上进行超声。

　　3.六通阀的使用和维护注意事项：

　　①样品溶液进样前必须用滤膜过滤，以减少微粒对进样阀的磨损。

　　②转动阀芯时不能太慢，更不能停留在中间位置，否则流动相受阻，使泵内压力剧增，甚至超过泵的**压力；再转到进样位时，过高的压力将使柱头损坏。

　　③为防止缓冲盐和样品残留在进样阀中，每次分析结束后应冲洗进样阀。通常可用水冲洗，或先用能溶解样品的溶剂冲洗，再用水冲洗。

　　4.色谱柱柱压升高的主要因素：

　　①LC-10AT/20AT/10ATPlus泵的单向阀堵塞。

　　②色谱柱的入口筛板堵塞。

　　③吸滤头堵塞。

　　④PEEK管接口处堵塞。

　　5.色谱柱柱压不稳的因素：

　　①泵内有空气。

　　②泵密封垫损坏。

　　③溶剂中的气泡。

　　④系统检漏，找出漏点。

　　6.样品峰保留时间漂移的主要因素：

　　①室内温度变化过大。

　　②流动相成分发生变化。

　　③色谱柱未平衡好。

　　④泵中有气泡。

　　⑤该流动相是否适宜此样品的检测。

　　7.基线漂移的主要因素：

　　①柱温波动。

　　②流动相不均匀。

　　③流通池被污染或有气体。

　　④检测器出口阻塞。

　　⑤流动相配比不当或流速变化。

　　⑥流动相污染、变质。

　　⑦使用循环溶剂。

　　8.检测器灵敏度不够的主要因素：

　　①样品进样量不足。

　　②波长设置不正确。

　　③检测器池窗污染。

　　④检测池中有气泡。

　　⑤电压不稳。

　　⑥流动相流速不合适。

　　9.色谱柱的使用和维护注意事项：

　　①避免压力和温度的急剧变化及**机械震动。柱压的突然升高或降低也会冲动柱内填料，因此在调节流速时应该缓慢进行，在阀进样时阀的转动不能过缓。

　　②应逐渐改变溶剂的组成，特别是反相色谱中，不应直接从有机溶剂改变为**是水，反之亦然。

　　③一般说来色谱柱不能反冲，只有生产者指明该柱可以反冲时，才可以反冲除去留在柱头的杂质。否则反冲会迅速降低柱效。

　　④选择使用适宜的流动相（尤其是pH），以避免固定相被破坏。

　　⑤避免将复杂的样品尤其是生物样品直接注入柱内，需要对样品进行预处理或者在进样器和色谱柱之间连接一保护柱。

　　⑥经常用强溶剂冲洗色谱柱，**保留在柱内的杂质。

　　⑦保存色谱柱时应将柱内充满乙腈或甲醇，柱接头要拧紧，防止溶剂挥发干燥。**禁止将缓冲溶液留在柱内静置至次日或更长时间。

　　⑧色谱柱使用过程中，如果压力升高，一种可能是滤片被堵塞，这时应更换滤片或将其取出进行清洗；另一种可能是大分子进入柱内，使柱头被污染；如果柱效降低或色谱峰变形，则可能柱头出现塌陷，死体积增大。

　　⑨以硅胶为基质的填料，只能在pH2~9范围内使用。每次分析检测完成后，***好用洗脱能力强的洗脱液冲洗，例如ODS柱宜用甲醇冲洗至基线平衡。

　　10.样品必须用直径为2.5cm，孔径为0.45ｕm的滤膜针式过滤。如有明确要求需用离心过滤的，经离心过滤后取上清液即可。