水质对液相色谱法的影响分析 液相色谱使用方法

　　【***** 使用手册】液相色谱法即HPLC属于液相色谱法中的一种，是目前各个涉及液相色谱法行业中一种较为重要的色谱法。HPLC目前在科研中有着重要作用，一般在化工行业学科、农业学科、医学类学科和法检等各个专业领域中起着重要的作用。在目前部分HPLC分析中，一般使用的是瓶装纯净水和蒸馏水，但是目前这两类水并不是超纯水，因而水中还是有少量的杂质，这类杂质混合入配置液相和洗脱液不仅会影响HPLC的分析分析结果，还会对设备产生损坏。而在一般使用的水中又会又哪些物质对水质产生影响呢？而这类物质对分析结果的影响又有哪些呢？一般情况下颗粒、有机物、离子、胶体、微生物等会对水质有影响并影响HPLC的分离分析结果。　　1. 水中的固体杂质对HPLC的影响。在水质较差的条件下，水中可能会有细微的颗粒物存在。水中的这类细微颗粒物会对仪器造成损害，不仅会损坏泵和注射器，还会堵塞色谱柱并且熔化它，这会使仪器回压变大。除此之外，细微颗粒物会表现成另一种固定相，会对样品的组成部分造成影响。　　2. 水中的有机物对HPLC的影响。一般的水质中都会含有一些有机物存在，而在水中的有机物不仅会影响固定相的选测性以及色谱本身的基线，还会对色谱峰的分离度和积分产生影响，并且可能会导致鬼峰。　　3. 水中的微生物对HPLC的影响。在一般的水中，大部分都有微生物的存在，而微生物的存在会堵塞色谱柱，并且微生物存活的代谢产物会增加有机物，颗粒等垃圾，这对HPLC的影响上述两点已经说明。　　4. 水中的一些离子对HPLC的影响。在水中存在大量的阴阳离子，其中有一些会吸收UV(紫外线)的离子会对峰产生影响，而另一些有腐蚀性离子会损坏高压输液泵等配件，降低其使用寿命，并且离子浓度的改变会影响HPLC的分离分析结果。　　5. 水中的胶体对HPLC的影响。在水中存在的各类物质容易形成胶体，而胶体会不可逆的吸附在固定相上面，从而对色谱柱的分离分析结果产生影响。　　那么使用什么水才能尽可能排除掉这些影响呢？超纯水便是一个很好的选择，超纯水的制作过程综合了反渗透、离子交换、活性炭吸附、膜过滤、超滤及紫外光氧化等多种纯化工艺，从而使超纯水的水质尽可能达到无杂质，所以超纯水可以尽可能排除上述影响因素，是HPLC的合适选择。 有关液相色谱仪的系统组成介绍

液相色谱仪系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。

储液器中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相；

被流动相载入色谱柱（固定相）内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数；

在两相中作相对运动时，经过反复多次的吸附-解吸的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别；

被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪；

数据以图谱形式打印出来**液相色谱仪主要有进样系统、输液系统、分离系统、检测系统和数据处理系统；

下面将分别叙述其各自的组成与特点。

进样系统

一般采用隔膜注射进样器或高压进样间完成进样操作，进样量是恒定的。

这对提高分析样品的重复性是有益的。

输液系统

该系统包括高压泵、流动相贮存器和梯度仪三部分。

高压泵的一般压强为47～44X10Pa，流速可调且稳定，当高压流动相通过层析柱时；

可降低样品在柱中的扩散效应，可加快其在柱中的移动速度；

这对提高分辨率、回收样品、保持样品的生物活性等都是有利的。

流动相贮存器和梯度仪，可使流动相随固定相和样品的性质而改变；

包括改变洗脱液的极性、离子强度、PH值，或改用竞争性抑制剂或变性剂等。

这就可使各种物质（即使**一个基团的差别或是同分异构体）都能获得有效分离。

分离系统

该系统包括色谱柱、连接管和恒温器等。

色谱柱一般长度为10～50cm（需要两根连用时，可在二者之间加一连接管）；

内径为2～5mm，由"优质不锈钢或厚壁玻璃管或钛合金等材料制成；

住内装有直径为5～10μm粒度的固定相（由基质和固定液构成）。

固定相中的基质是由机械强度高的树脂或硅胶构成；

它们都有惰性（如硅胶表面的硅酸基因基本已除去）、多孔性（孔径可达1000?）和比表面积大的特点；

加之其表面经过机械涂渍（与气相色谱中固定相的制备一样）；

或者用化学法偶联各种基因（如磷酸基、季胺基、羟甲基、苯基、氨基或各种长度碳链的烷基等）或配体的有机化合物。

因此，这类固定相对结构不同的物质有良好的选择性。

例如，在多孔性硅胶表面偶联豌豆凝集素（PSA）后，就可以把成纤维细胞中的一种糖蛋白分离出来。

另外，固定相基质粒小，柱床极易达到均匀、致密状态，极易降低涡流扩散效应。

基质粒度小，微孔浅，样品在微孔区内传质短。这些对缩小谱带宽度、提高分辨率是有益的。

根据柱效理论分析，基质粒度小，塔板理论数N就越大。

这也进一步证明基质粒度小，会提高分辨率的道理。

再者，**液相色谱的恒温器可使温度从室温调到60C；

通过改善传质速度，缩短分析时间，就可增加层析柱的效率。