安捷伦液相色谱仪的使用规范 液相色谱使用方法

　　安捷伦液相色谱仪的规范操作　　1. 目的：明确安捷伦液相色谱仪的规范操作，确保数据的准确性。　　2. 范围：适用于安捷伦液相色谱仪。　　3.职责：检验人员对此负责。　　4.操作规程：　　4.1系统组成　　本系统由1个溶剂二元输送泵(分主/A泵和副/B泵)、手动进样阀、柱温箱、检测器、化学工作站和电脑等组成。　　4.2安捷伦液相色谱仪准备　　4.2.1使用前应根据待检样品的检验方法准备所需的流动相，用合适的0.45μm滤膜过滤，超声脱气20min。　　4.2.2 根据待检样品的需要更换合适的色谱柱(柱进出口位置应与流动相流向一致)和定量环。　　4.2.3 配制样品和标准溶液(也可在平衡系统时配制)，用合适的0.45μm滤膜过滤。　　4.2.4 检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正常　　4.1 将待测样品按要求前处理，准备HPLC 所需流动相，检查线路是否连接完好，废液瓶是否够用等。　　4.3安捷伦液相色谱仪开机：　　4.3.1 打开计算机,进入中文Windows XP画面,并运行CAG Bootp Server程序。　　4.3.2打开 1200 LC 各模块电源。　　4.3.3 待各模块自检完成后，双击[Instrument 1 Online]图标，化学工作站自动与1200LC　　通讯，进入的工作站画面如下所示。　　4.3.4 从[视图]菜单中选择[方法和运行控制]画面, 点击[视图]菜单中的[显示顶部 工具栏]， [ 显示状态工具栏]，[系统视图],[样品视图]，使其命令前有[√]标志，来调用所需的界面。　　4.3.5把流动相放入溶剂瓶中。　　4.3.6打开冲洗阀。　　4.3.7点击[泵]图标，点击[设置泵…]选项，进入泵编辑画面。　　4.3.8设流速：5ml/min，点击[确定]。　　4.3.9 点击[泵] 图标，点击[控制…]选项，选中[启动]，点击[确定] ，则系统开始冲洗，直到管线内(由溶剂瓶到泵入口)无气泡为止,切换通道继续冲洗，直到所有要用通道无气泡为止。　　4.3.10 点击[泵] 图标，点击[控制…]选项，选中[关闭]，点击[确定]关泵， 关闭冲洗阀。　　4.3.11 点击[泵]图标，点击 [设置泵…选项]，设流速：1.0ml/min。　　4.3.12 点击泵下面的瓶图标，如下图所示(以单元泵为例)，输入溶剂的实际体积和瓶体积。 也可输入停泵的体积，点击[确定]。　　4.4安捷伦液相色谱仪的数据采集方法编辑　　4.4.1开始编辑完整方法：从[方法]菜单中选择[编辑完整方法…] 项，如下图所示选中除[数据分析 ]外的三项，点击[确定]，进入下一画面。 4.4.2方法信息　　4.4.2.1在[方法注释]中加入方法的信息(如：测试方法)。 4.4.2.2 点击 [确定]， 进入下一画面。 4.4.3 泵参数设定　　4.4.3.1 在[流速]处输入流量,如1ml/min，在[溶剂 B]处输入80.0,(A=100-B) ,也可[插入 ]一行[时间表] ,编辑梯度。在[压力限]处输入柱子的zui大耐高压，以保护柱子。　　4.4.3.2 点击[确定]，进入下一画面。　　4.4.4柱温箱参数设定　　4.4.4.1 在[温度]下面的空白方框内输入所需温度,如：40度。并选中它,点击[更多>>] 键,如图所示,选中[与左侧相同]，使柱温箱的温度左右一致。　　4.4.4.2点击[确定]，进入下一画面。　　4.4.5 检测器参数设定：检测波长：一般选择zui大吸收处的波长。样品带宽：一般选择zui大吸收值一半处的整个宽度。参比波长：一般选择在靠近样品信号的无吸收或低吸收区域 。参比带宽：至少要与样品信号的带宽相等，许多情况下用100nm作为缺省值。同时可以输入采集光谱方式，步长，范围，阈值。选中所用的灯。　　4.4.6在[ 运行时选项表 ]中选中[ 数据采集]，点击[确定]。　　4.4.7 点击[方法]菜单，选中[方法另存为…]，输入一方法名，如[测试]，点击[确定]。　　4.4.8 从菜单 [视图]中选中[在线信号],选中[信号窗口1],然后点击[改变…] 钮,将所要绘图的信号移到右边的框中,点击[确定]。(如同时检测二个信号,则重复10,选中[信号窗口2]。　　单击[改变]键，即可弹出右侧的[编辑信号图谱]窗口，进而选择所需的谱图信号。 4.4.9 从[运行控制]菜单中选择[样品信息]选项，如下图所示，输入操作者名称，如[安装工程师]；在[数据文件 ]中选择[手动]或[前缀/计数器]。区别: 手动--每次做样之前必须给出新名字,否则仪器会将上次的数据覆盖掉。 Pr—在前缀/计数器----[前缀]框中输入前缀，在[计数器]框中输入计数器的起始位，仪器会自动命名，如vwd数据0001，vwd数据0002……。　　4.4.10 点击[确定] ,从[仪器] 菜单选择[系统开启]。　　4.4.11 等仪器准备好，基线平稳，用试样溶液清洗注射器，并排除气泡后抽取适量。　　4.5安捷伦液相色谱仪的数据分析方法编辑:　　4.5.1 从[视图]菜单中，点击[数据分析]进入数据分析画面。　　4.5.2 从[文件]菜单选择[调用信号]，选中您的数据文件名，如下图所示。点击[ 确定]，则数据被调出。　　4.5.3做谱图优化：从[图形]菜单中选择[信号选项]，如下图所示。从[范围] 中选择[满量程] 或[自动量程] 及合适的时间范围或选择[自定义量程] 调整。反复进行，直到图的比例合适为止。点击[ 确定]。　　4.6安捷伦液相色谱仪积分:　　4.6.1 从[积分]菜单中选择[积分事件]选项，如下图所示。选择合适的[斜率灵敏度]　　，[峰宽]，[zui小峰面积]，[zui小峰高]。 **液相色谱分析中基线很粗的话要考虑的方面 　　**液相色谱分析中基线很粗的话，需要考虑的方面较多，主要如下：

　　1、首先检查**液相色谱仪的噪声，如果噪声大，会引起基线变粗，需要采取措施降低噪声；如果基线粗是因为噪声大引起，要解决这个问题就要看你的检测器和工作站的指标以及压力是否平稳，然后可以通过脱气等一系列的方法降低噪声。

　　2、调节你的电脑分辨率，如果分辨率太低，调节一下就会见效。

　　3、还可能是采样频率高。将检测器的狭缝宽度设置得小一点，可能很快就能解决问题。

　　4、如果是工作站得坐标太大，调节一下，将坐标设置小点就可能解决问题。

　　5、有可能是光源用久了，能量不足引起，这样的话应该调换光源。

　　6、电源的纹波太大，也会引起基线变粗，这个问题很多科技工作者不大注意没，所以还应该仔细检查光源的电路。

　　7、光路通道有污染或流动池污染。如果这样，就要清洗光路通道中的光学组件，或者清洗流动池。

　　8、可流动相中有气泡，应认真排气。

　　9、如果确定不是色谱系统的原因，就可能是电源接地的问题，将检测器外壳、接收装置外壳和电脑的外壳等用电线连起来，认真的接地。