实用小贴士之液相色谱柱如何使用 液相色谱使用方法

色谱柱是**液相色谱仪的重要组成部分，在色谱仪分析系统中起着分离作用，是色谱分析的核心部件，对**液相色谱柱的正确使用不仅能延长色谱柱的使用寿命，还能有效保证实验结果。

以下简单介绍液相色谱柱

在使用过程中应当注意的问题

01

性能测试

新色谱柱使用前，应进行柱的性能测试，并将结果保存起来，作为今后评价柱性能变化的参考依据 (柱性能由于所使用的样品、流动相、柱温等条件的差异有所不同，在测试中需保证方法一致性）。

02

流动相的配制

液相色谱是通过样品组分在柱填料与流动相之间质量交换而达到分离的目的，因此要求流动相具备以下的特点：

• 流动相对样品具有**的溶解能力，保证样品组分不会沉淀在柱中（或长时间保留在柱中）。

• 流动相具有**惰性，与样品不产生化学反应。

• 流动相的黏度要尽量小，以便在使用较长的分析柱时既能得到好的分离效果，同时又降低柱压，延长柱子的使用寿命（可运用提高温度的方法降低流动相的黏度）。

• 流动相的物化性质与使用的检测器相适应。

• 流动相沸点不要太低，否则容易产生气泡，导致实验无法进行。

• 流动相配制好后，**要进行脱气，除去溶解在流动相中的微量气体。

03

新色谱柱使用前冲洗步骤

1、首先查看色谱柱的说明书，注意色谱柱封存的溶剂、推荐流速、pH值、耐受柱压、及使用温度等信息。

2、如分析使用的流动相与色谱柱内储存的溶剂混溶，可以直接使用流动相参照色谱柱说明书中推荐的流速、温度等条件冲洗色谱柱20倍柱体积以上。如果分析条件使用的流动相与色谱柱内储存的溶剂不混溶，请选择与色谱柱内储存溶剂和流动相都混溶的溶剂，作为置换溶剂，逐步置换到分析使用的流动相。每次置换均应冲洗色谱柱20倍柱体积以上。

04

日常使用注意事项

1、请使用HPLC级别以上的试剂作为流动相。

2、流动相要用0.45um孔径以下的微孔滤膜滤过。

3、流动相的pH值不能超出色谱柱的适用范围。

4、注意流动相的流动方向要与色谱柱标识的方向一致。

5、容易滋生微生物的流动相不要存放过久，要及时换新，以免微生物滋生污染色谱柱。

6、色谱柱分析结束后要及时**冲洗。

7、长时间不用的色谱柱要将流动相置换为色谱柱保存的溶剂，并两端用堵头封死保存。

8、色谱柱要避免剧烈碰撞、跌落等。

05

流动相流速的选择

因柱效是柱中流动相线性流速的函数，使用不用的流速可得到不同的柱效。对于一根特定的色谱柱，要追求较佳柱效，应使用zui佳流速。对内径为4.6mm的色谱柱，流速一般选择1mL/min，对于内径4.0mm柱，流速0.8mL/min为更佳。当选用zui佳流速时，分析时间可能延长。可采用改变流动相的洗涤强度的方法以缩短分析时间（如使用反相柱时，可适当增加有机试剂甲醇或乙腈的含量）。

液相色谱柱在色谱分析中起着至关重要的角色，是样品分离的核心，正确使用色谱柱才能达到更好的理想的分离效果，提高色谱柱的使用寿命。

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　　（1）照明：

　　室内照明要光线适中，避免阳光直射。为避开直射光线对仪器操作、观测的影响，仪器(显示屏)应侧向光线。实验室窗户要挂窗帘，以便随时调节光照强度。

　　（2）通风：

　　使用液相色谱仪分析过程中，由于流动相中含有挥发性有机溶剂（甲醇、乙睛等）会产生有害气体，对仪器中的光学元件带来腐蚀，应注意仪器室的通风，以排除室内有害气体、保持空气清新。

　　通风主要有两种方式:一种自然通风，定时打开门窗，让内外空气对流;另一种是强制通风，如用通风柜、排风扇等，及时将有害气体排出室外。

　　（3）环境温度和湿度：

　　适宜的温度和湿度是保障HPLC仪正常运行、性能稳定的必要条件。

　　HPLC仪一般要求室温在20一30℃之间，日温度变化2一3℃，不要波动太大，否则，在开机分析时会影响色谱分离;

　　夏季**要控制室温不要超过30℃，温度太高会使流路系统产生气泡，影响检测器的正常工作（如荧光检测器）。室内相对湿度应控制在60%以下。

　　（4）供电：

　　液相色谱室应设有照明电源和动力电源，动力电可供仪器运行使用。为减少噪音的干扰，仪器应远离瞬时供电的大功率电器设备，如:大型电动设备（**温冰箱、电烤箱等）、电梯、空调系统等。为保证HPLC输液泵的精度，必须要保证稳定的输人电压，为此，建议色谱室应设有和仪器负荷相当的稳压电源。室内墙上应安装有接地电阻符合要求的地线，用于仪器设备保护性接地的公用地线接地电阻≤4Ω。

　　（5）洁净度：

　　悬浮于空气中的颗粒物质会对色谱仪器分析带来干扰，使本底和噪声升高，成为分析测试的污染源，直接影响高纯物质的纯度与痕量杂质的分析。