制备型液相色谱仪应如何选择使用条件 液相色谱使用方法

　　【*** 使用手册】制备型液相色谱仪目的是对产品的单体进行提取和纯化，与蒸馏、萃取等纯化方法相比制备型液相色谱法更有效，但对操作的要求也更高。为保证制备型液相色谱仪可以达到理想的实验效果，需要谨慎选择操作条件，减少影响分离效果的因素。　　色谱柱的选择　　色谱柱的容量有**限制，每种色谱柱都有自己的负载能力，因此样品的导入值上限需要根据所用的色谱柱确定。色谱柱与大样品量的关系如下：　　1.色谱柱内半径越大，柱子的负载能力越高。　　2.分配系数K增加，柱子的负载能力也会增加。同时，溶质的保留体积同样也会增加。　　3.色谱柱的填充方法影响着填充密度，用良好方法填充的柱子密度趋近它的大值，柱子的样品量和分辨率同样也会趋近大值。　　4.采用表面积大的吸附剂虽然会减弱色谱系统的速度和适用范围，但可以增加柱子的负载能力。　　5.柱子的负载能力还随着柱子的长度增加而增长，但柱子过长会损失柱效。　　6.填料颗粒的大小与柱子负载量也呈正相关关系。　　样品的溶解　　样品在溶剂里的溶解度会影响注入的大样品量。在流动相里难溶解的物质通常不能充分分离或分辨率比较低，因此需要先将样品溶解在另一种溶剂中，再将这种溶液送人色谱分离系统。中间溶剂的选择很重要，并且需要经验。　　流动相的纯度　　流动相的纯度与样品中的纯度息息相关。在分离组分特性相近或痕量组分时，流动相里的杂质还可能污染色谱柱，影响分离效能。因此流动相须保证纯净。　　流动相的流速　　流动相的流速与分离速度、分离效率相关，流速越快分离速度越快，但分离效率越低，因此需要选择合适的速度保证速度与效率并重。　　固定相的选择　　为了分辨效果，应尽量选择吸附色谱。从填料的容量看，全多孔型比表面多空型好；从固定相微粒的大小看，30~50μ较常用。 液相色谱仪5种常见故障及处理方法

　　液相色谱仪是一种常用的分析仪器，主要由高压输液泵、进样系统、温度控制系统、色谱柱、检测器、信号记录系统等部分组成，被广泛用于生物医学、环境化学、石油化工等领域中。

　　1、柱压高原因

　　(1)缓冲液盐分如(乙酸铵等)沉积于柱内;

　　(2)样品污染沉积。处理对于**种情况先用40～50℃的纯水，低速正向冲洗柱子，待柱压逐渐下降后，相应提高流速冲洗，柱压大幅度下降后，用常温纯水冲洗，之后用纯甲醇冲洗柱子30分钟;对于第二种情况，由样品的沉积引起污染的C18柱，和纯水反向冲洗柱子，然后换成甲醇冲洗，接着用甲醇+异丙醇(4+6)冲洗柱子(冲洗时间的长短由样品污染的情况而定)，再用换成甲醇冲洗，然后用纯水冲洗，***后甲醇冲洗正向冲洗柱子30分钟以上。

　　2、气泡溢出

　　流动相内有气泡，关闭泵，打开泄压阀，打开purg键，清洗脱气，气泡不断从过滤器冒出，进入流动相，无论打开purge键几次，都无法**不断产生的气泡。原因过滤器长期沉浸于乙酸铵等缓冲液内，过滤器内部由于霉菌的生长繁殖，形成菌团，阻塞了过滤器，缓冲液难以流畅地通过过滤器，空气在泵的压力作用下经过滤器进入流动相。处理过滤器浸泡于5%硝酸溶液中，超声清洗几分钟即可;亦可将过滤器浸泡于5%硝酸溶液中12～36小时，轻轻震荡几次，再将过滤器用纯水清洗几次，打开泄压阀，打开purge键清洗脱气，如仍有气泡不断从过滤器冒出，继续将过滤器浸泡于5%硝酸溶液中，如没有气泡不断从过滤器中冒出，说明过滤器内部的霉菌菌团已被硝酸破坏，流动相可以流畅地通过过滤器。打开泄压阀，打开泵，流速调至1.0～3.0ml/min，纯水冲洗过滤器1小时左右。即可将过滤器清洗干净。关闭泄压阀，纯甲醇冲洗半小时即可。

　　3、既无压力指示，又无液体流过

　　(1)泵密封垫圈磨损;

　　(2)大量气泡进入泵体。处理对于**种情况，更换密封垫圈;对于第二种情况，在泵作用的同时，用一个50ml的玻璃针筒在泵的出口处帮助抽出空气。

　　4、压力波动大，流量不稳定

　　原因系统中有空气或者单向阀的宝石球和阀座之间夹有异物，使得两者不能密封。处理工作中注意观察流动相的量，保证不锈钢滤器沉入储液器瓶底，避免吸入空气，流动相要充分脱气。如为单向阀和阀座之间夹有异物，拆下单向阀，放入盛有丙酮的烧杯用超声波清洗。

　　5、出峰不佳，峰分叉

　　(1)色谱柱被污染;

　　(2)柱头填料塌陷。处理对于**种情况，先用纯水反向冲洗柱子，然后换成甲醇冲洗，接着用甲醇+异丙醇(4+6)冲洗柱子(冲洗时间的长短由样品污染的情况而定)，再换成甲醇冲洗，然后用纯水冲洗，***后甲醇冲洗正向冲洗柱子30分钟以上。如冲洗后依然出峰不佳，则考虑第二种情况。对于第二种情况，拧开柱头，检查柱填料是否硬结或塌陷。去除硬结部分(污染的填料)，装入新填料，滴一滴甲醇，填料下陷，再填，用与柱内径相同的顶端平滑的不锈钢杆压紧，再填平，滴甲醇，再压紧反复几次，直至装满填平。柱头用甲醇冲洗干净，擦净柱外壁的填料，拧紧柱头，用纯甲醇冲洗30分钟以上。